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[发明专利]一种高效产β-葡萄糖醛酸酶混合菌剂的制备方法-CN202011377974.3在审
发明人：徐志文;杜佩珊;王昊;赵夕锐;李怡瑾;盛雪;王玉洁;黄星傑;朱玲;沈留红 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2021-03-12 - 主分类号： C12N1/36 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效产β‑葡萄糖醛酸酶混合菌剂的制备方法，包括步骤一，新鲜动物胆囊样本采集；步骤二，大肠杆菌分离；步骤三，大肠杆菌鉴定；步骤四，大肠杆菌胆汁存活筛选；步骤五，胆酸多浓度梯度定向诱导培育；步骤六，牛胆囊仿生动态模拟培育；步骤七，大肠杆菌β‑G活性测定；步骤八，菌液混合培养；步骤九，动物毒性试验检测；该发明通过胆汁和胆酸的驯化定向得到在胆汁中存活时间长、繁殖活力高的大肠杆菌菌株；通过牛胆囊仿生动态模拟得到适应胆囊环境变化的大肠杆菌菌株；通过PCR技术、菌液混合、酶活力测定得到β‑G活力高的大肠杆菌菌株；通过毒素、毒性结合筛选，得到对动物生长影响最小的大肠杆菌菌株。
一种高效葡萄糖醛酸混合制备方法

[发明专利]一种利用大肠杆菌降解黄原胶制备黄原胶寡糖的方法-CN202010117878.9有效
发明人：杨帆;谷金芸;李宪臻 -专利权人：李宪臻
申请日： 2020-02-25 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12P19/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用大肠杆菌降解黄原胶制备黄原胶寡糖的方法，属于生物技术技术领域。本发明包括如下步骤：(1)培养大肠杆菌，得到大肠杆菌菌液；(2)大肠杆菌液经高压匀浆破碎后制备大肠杆菌胞内蛋白液；(3)大肠杆菌胞内蛋白液冷冻干燥，得大肠杆菌胞内蛋白粉；(4)将黄原胶和大肠杆菌胞内蛋白粉分别溶于缓冲液中本发明提供了大肠杆菌降解黄原胶的方法，提供了制备黄原胶寡糖的最优条件，为黄原胶寡糖的工业化生产建立起夯实的基础。
一种利用大肠杆菌降解黄原胶制备寡糖方法

[发明专利]一种以大肠杆菌菌影为载体装载紫杉醇药物的制备方法-CN201810182543.8在审
发明人：刘云;只勇;张震;雷磊;牟婧 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2018-03-06 - 公布日： 2018-07-27 - 主分类号： A61K47/69 文献下载
摘要：一种以大肠杆菌菌影为载体装载紫杉醇药物的制备方法属于生物制药技术；包括：①、将温控裂解质粒转化到大肠杆菌内，培养至对数生长期进行诱导表达，得到无活性大肠杆菌菌影菌液；②、将诱导后无活性大肠杆菌菌影菌液离心处理取沉淀物，将沉淀物制备成无活性大肠杆菌菌影冻干粉；③、将紫杉醇配制成溶液；④、将无活性大肠杆菌菌影冻干粉与紫杉醇溶液共孵育后，离心取沉淀物，得无活性大肠杆菌菌影装载紫杉醇成份的紫杉醇药物；本药物采用无活性的大肠杆菌菌影为紫杉醇药物的载体
菌影活性大肠杆菌紫杉醇药物大肠杆菌制备装载冻干粉紫杉醇离心取沉淀物生物制药技术对数生长期免疫刺激性紫杉醇溶液菌液离心抗癌治疗取沉淀物诱导表达质粒转化靶向性共孵育缓释性菌液裂解温控诱导

[发明专利]鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗、制备方法及其应用-CN201210435934.9有效
发明人：罗玲;艾地云;邵华斌;温国元;罗青平;王红琳;杨峻;张蓉蓉 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2012-11-06 - 公布日： 2013-04-03 - 主分类号： A61K39/116 文献下载
摘要：本发明涉及鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗、制备方法及其应用。它包含鸭大肠杆菌菌株ECHB-3、鸭大肠杆菌菌株ECHB-9、鸭大肠杆菌菌株ECHB-40的灭活菌液，所述灭活菌液中的活菌总数为30~60亿cfu/mL；所述鸭大肠杆菌菌株ECHB-3已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：M2011438；所述鸭大肠杆菌菌株ECHB-9已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：M2011439；所述鸭大肠杆菌菌株ECHB-40已保藏于中国典型培养物保藏中心
大肠杆菌区域优势血清疫苗制备方法及其应用

[发明专利]一种用于大肠杆菌定量检测的选择性培养基及大肠杆菌定量检测方法-CN201510606786.6有效
发明人：王深琪;樊延淼 -专利权人：华中科技大学
申请日： 2015-09-19 - 公布日： 2019-07-23 - 主分类号： C12Q1/06 文献下载
摘要：一种用于大肠杆菌定量检测的选择性培养基及大肠杆菌定量检测方法。用于大肠杆菌定量检测的选择性培养基定量检测大肠杆菌的方法，将待检测细菌样品接种到上述用于大肠杆菌定量检测的选择性培养基中，于无氧条件下，25‑44℃，150‑280rpm，培养7‑15h后检测菌液pH值，根据菌液pH值和大肠杆菌初始浓度关系标准曲线计算出样品中大肠杆菌的数量。本发明方法用于大肠杆菌的定量检测，快速、准确、灵敏度高。
一种用于大肠杆菌定量检测选择性培养基方法

[发明专利]一种消除耐药大肠杆菌对抗生素耐药性的方法-CN202010750255.5在审
发明人：杨伟国;吴水林;毛丛杨 -专利权人：香港大学深圳医院
申请日： 2020-07-30 - 公布日： 2020-10-23 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种消除耐药大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，该方法为：将光热材料和对耐药大肠杆菌具有抗菌作用的抗生素的混合溶液与耐药大肠杆菌混合，得到待处理菌液，采用近红外激光照射待处理菌液，并控制激光的功率，使待处理菌液的温度维持在45～100℃。本发明将光热材料和抗生素的混合溶液与耐药大肠杆菌混合，再采用近红外激光照射，即基于光热辅助的机制，利用光热材料在近红外激光照射下产生的热量消除耐药大肠杆菌对抗生素的耐药性，有效解决了目前普通抗生素对耐药大肠杆菌的治疗效率大幅度减弱
一种消除耐药大肠杆菌抗生素耐药性方法

[发明专利]一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法及其应用-CN202310706376.3在审
发明人：刘啸尘;孙琳琳;武占省;何艳慧;田飞;周小虎;贾欣玉 -专利权人：西安工程大学
申请日： 2023-06-14 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法及其应用，包括以下步骤：将大肠杆菌BL‑EF和霍氏肠杆菌Rs‑2分别活化培养，大肠杆菌BL‑EF培养菌体生长至对数期末期时，加入IPTG低温诱导。使用生理盐水分别稀释得到的高效表达ACC脱氨酶的大肠杆菌BL‑EF发酵液和霍氏肠杆菌Rs‑2发酵液，制成高效表达ACC脱氨酶的大肠杆菌BL‑EF菌液和霍氏肠杆菌Rs‑2菌液，然后将高效表达ACC脱氨酶的大肠杆菌BL‑EF菌液和霍氏肠杆菌Rs‑2菌液按体积比例为3：1混合，得到解盐促生复合微生物菌剂。
一种解盐促生复合微生物制备方法及其应用

[发明专利]一种猪大肠杆菌病灭活疫苗的制备方法-CN201510066455.8在审
发明人：宋玉伟;王国栋;梁秀丽;冯东亚;李春堂 -专利权人：安阳工学院
申请日： 2015-02-07 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： A61K39/116 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪大肠杆菌病灭活疫苗的制备方法，具体方法为分离得到血清型为O60，O101和O138致病性的猪大肠杆菌菌株，进行种子培养和扩大培养后，制备获得各菌株菌液，对菌液进行活菌计数，各菌株细菌悬液活菌的含量不低于100亿CFU/mL，符合要求的进行菌液灭活，经灭活的大肠杆菌混合菌液，按照每毫升混合菌液含蜂胶9-10mg的比例加入蜂胶提取液，加注过程中要边加边摇荡，制成浊状菌苗。结果表明，疫苗使用后，因大肠杆菌引起的仔猪黄白痢的发病率为7.69％，死亡率1.92％；未免疫仔猪的黄白痢发病率为32.65％，死亡率14.29％，说明疫苗免疫效果较好。
种猪大肠杆菌病灭活疫苗制备方法

[发明专利]一种绵羊大肠杆菌的攻毒方法-CN201910119205.4在审
发明人：孙伟;鲍建军;金澄艳;吕晓阳;高雯;于嘉瑞;陈炜昊 -专利权人：扬州大学
申请日： 2019-02-18 - 公布日： 2019-04-19 - 主分类号： A01K67/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种绵羊大肠杆菌的攻毒方法，包括以下步骤：将试验羔羊分为健康对照组和攻毒试验组；攻毒第一阶段对试验羔羊饲喂代食料，绘制大肠杆菌生长曲线；攻毒第二阶段对试验羔羊用注射器灌喂F17大肠杆菌菌液；每6小时观察一次羔羊状态，记录羔羊粪便形态，并根据羔羊生理状态结合细菌生长曲线调整大肠杆菌菌液剂量；连续灌喂3 d直至羔羊生理状态维持不变，以“正常”（1型，2型）、“糊状”（3型）、“水样”（4型）三种粪便黏稠度为标准进行记录本发明提出的一种绵羊大肠杆菌的攻毒方法，有针对性地提高了绵羊大肠杆菌的攻毒成功率。
羔羊大肠杆菌绵羊大肠杆菌菌液生理状态粪便试验细菌生长曲线生长曲线试验组黏稠度注射器糊状记录食料水样饲喂成功率绘制观察健康

[发明专利]一种获取重组大肠杆菌中丙酮酸氧化酶的方法-CN201810851942.9在审
发明人：张建国;卢俊文 -专利权人：上海理工大学
申请日： 2018-07-30 - 公布日： 2018-11-13 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明提供一种获取重组大肠杆菌中丙酮酸氧化酶的方法，包括如下步骤：将含有丙酮酸氧化酶的表达基因的重组大肠杆菌pET28a‑pod接种至固体培养基上进行活化，得到活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod；将活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod接种至放于摇床上的LB培养基并进行摇动，得到活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod的种子液；接种该种子液至TB培养基进行培养，培养至浓度为第一细胞浓度后加入诱导剂进行诱导，当浓度为第二细胞浓度后不断加入盐酸溶液进行发酵至pH值为5.5‑6.5，然后继续诱导，得到菌液I；取菌液I进行离心后倒去上清液，用PBS溶液洗涤两次后用等体积的PBS溶液进行重悬，得到重悬液；对重悬液进行超声破碎，得到超声破碎后的菌液II；取菌液II
重组大肠杆菌丙酮酸氧化酶活化菌液接种超声破碎上清液种子液重悬液诱导固体培养基细胞表达基因盐酸溶液培养基诱导剂摇床摇动重悬洗涤发酵

[发明专利]近海岸大肠杆菌检测方法-CN201310533214.0无效
发明人：关杰;关宇;江美玲;曹卉;王清 -专利权人：大连大公环境检测有限公司
申请日： 2013-10-31 - 公布日： 2015-05-06 - 主分类号： C12Q1/10 文献下载
摘要：近海岸大肠杆菌检测方法，采用抽滤系统将海水中大肠杆菌截留在滤膜上，再将滤膜放置培养基中培养，所述滤膜为孔径0.45μm的微孔滤膜，检测溶液中加入胆盐乳糖增菌液中进行增菌操作，增菌30-48h，浑浊、产气判定为检出大肠杆菌所述培养基为伊红美蓝琼脂平板，所述培养时间10～12d，培养后观察大肠杆菌的菌落生长情况，当如果伊红美蓝琼脂平板分离有典型大肠杆菌菌落长出判定为检出。本发明近海岸大肠杆菌检测方法与传统的微生物检测方法相比，成本低、简便快速、敏感性高。
海岸大肠杆菌检测方法

[发明专利]一种大肠杆菌致奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤模型及其构建方法-CN202011015868.0在审
发明人：刘明超;姜国均 -专利权人：河北农业大学
申请日： 2020-09-24 - 公布日： 2020-12-18 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明属于细胞模型构建的技术领域，本发明提供了一种大肠杆菌致奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤模型的构建方法。本发明的构建方法，包括如下步骤：(1)通过传代培养获取奶牛子宫内膜上皮细胞；(2)将大肠杆菌接种到增殖培养基中进行增殖培养，然后分离大肠杆菌依次重悬于缓冲液和基础培养基中，调整浓度后得到大肠杆菌菌液；(3)取所述奶牛子宫内膜上皮细胞培养至贴壁，再接入所述大肠杆菌菌液进行培养，即构建得到奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤模型。
一种大肠杆菌奶牛子宫内膜上皮细胞损伤模型及其构建方法

[发明专利]一种厌氧环境下抑制大肠杆菌生长的方法-CN201910504744.X有效
发明人：汪联辉;吕扬帆;李小慧;宇文力辉;翁丽星;胡运 -专利权人：南京邮电大学
申请日： 2019-06-11 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12Q1/18 文献下载
摘要：本发明公开一种厌氧环境下抑制大肠杆菌生长的方法，包括如下步骤：(1)制备硒化钨纳米点；(2)测定了硒化钨纳米点氧化谷胱甘肽(GSH)的能力(3)用不同浓度的硒化钨纳米点在厌氧环境下对大肠杆菌进行抑菌生长；(4)测定步骤(3)中抑菌生长18小时后的菌液中的厌氧呼吸酶的活性，观察大肠杆菌表面形态。本发明厌氧环境下抑制大肠杆菌生长的方法可通过氧化作用和破坏细菌表面完整性杀伤细菌，并抑制厌氧呼吸钼辅酶活性，从而实现对大肠杆菌在厌氧环境下生长的抑制，能有效抑制大肠杆菌的厌氧生长。
一种环境抑制大肠杆菌生长方法

[发明专利]一种利用便携式血糖仪测定污泥重金属微生物毒性的方法-CN201810421192.1在审
发明人：司友斌;陶祥运;刘小红;张千;司雄元 -专利权人：安徽农业大学
申请日： 2018-05-04 - 公布日： 2018-10-23 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种评价污泥重金属微生物毒性的方法，主要是通过多次传代培养获得活性稳定的大肠杆菌，将其培养至稳定期后期收集并离心；然后使用生理盐水将上述菌液连续清洗两遍，再将其重悬制备成大肠杆菌液混合于含有葡萄糖的污泥重金属毒性液，使用便携式血糖仪测定培养30min前后混合液的葡萄糖浓度，当混合液中有重金属离子存在时，大肠杆菌生长受到抑制，消耗葡萄糖量相对减少，将葡萄糖消耗量折算成大肠杆菌生长抑制率。本发明方法采用大肠杆菌作为实验微生物，采用便携式血糖仪测定葡萄糖浓度，可在较短的反应时间内灵敏高效、稳定准确地评价污泥重金属的微生物毒性。
大肠杆菌污泥重金属便携式血糖仪葡萄糖微生物毒性混合液葡萄糖消耗量重金属离子传代培养活性稳定连续清洗葡萄糖量生长抑制生理盐水稳定期菌液折算制备重悬微生物灵敏消耗生长

[发明专利]一种大肠杆菌的多级培养方法-CN201510708159.3在审
发明人：林炳营 -专利权人：桂林瑞丰环保微生物应用研究所
申请日： 2015-10-27 - 公布日： 2016-01-13 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种大肠杆菌的多级培养方法。该方法包括步骤：1)将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中培养，并在琼脂平板上划线接种；2)将一级培养种子接种到第二培养基中培养；3)将二级培养种子接种到第三培养基中培养，保存；4)将三级培养种子接种于菌液中，并导入至离心管中，加入9～16％的琼脂，摇床过夜，再加入氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。本发明所提供的大肠杆菌的多级培养方法能稳定的对大肠杆菌进行培养，同时简化了微生物发酵培养条件，培养工艺实用，能够获得理想的实验室用高活菌浓度。
一种大肠杆菌多级培养方法

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